文章概要总结
组培的实验研究方案
快速繁殖的研究培养方案植到具体植物和每个人所面临的试验条件时，都会遇到一些问题，如怎样协调各个环节，怎样选取一些最佳条件，工作中出现的情况怎样判断是否正常，怎样克服不利影响，怎样诱导培养物朝我们所希望的方向发展等等。下面将介绍一些解决上述问题的方法，即提出问题、设计实验，通过对实验结果的分析，找到答案。许多实验方法在多数情况下要结合自己的工作经验加以灵活运用。在介绍各单项因素选取之前，先对常用的试验方法加以简要说明。（一）、植物组织培养中常用的试验方法1、预备性试验在对某种植物发生兴趣，或对某项因素产生疑惑，或阅读某篇论文后联想到自己的试验中有类似的问题，要初试一下，就可以简单拟定一个方案，比较粗略地判断一下○1该因素是否有影响？○2如果有影响，它大体的程度和数量如何？能用一次较粗略的试验判断出上面两个问题，就基本达到预期目的了。然后便可循着预备试验的路子，设计较为完整的实验方案，已取得准确可靠的试验数据和加深对问题的认识。预备性试验要求比较低，不必深思熟虑，不必很严格，往往灵机一动就做了。植物组织培养条件一旦具备之后，可以做许多工作，做了就摆在那里，观察培养物的反应，有反应的再接着做。通常愈有实验经验的人，愈能判断准确，是预备性试验有较高的命中率，能尽快发现科学研究上的突破口，并由此扩大战果。预备性试验规模较小，条件要求不必面面俱到。在精力允许的情况下多做一点预备性试验，它能加快前进的步伐。预备性试验得出否定的结果也是极有用的信息，它可能预示问题不在这方面，或问题并不简单，这样也会使研究的思考深化。总之预备性试验耗费时间与精力较少，问题直截了当，能使下一阶段的工作更有把握。许多正规的研究往往都要做一些预备性试验，以找准因素及因素水平。2、单因子试验单因子试验中，各项条件和因素都维持在一般水平上，只变动一个因子，以找出这一因子对试验的影响和影响的程度。例如MS生物试剂，其它营养成分和用量都不变，只变动NAA的用量在0,0.1,0.5,1.0mg/1之间，以找出NAA用量对某一培养生根的影响。这就是单因子试验。单因子试验，除了要研究的那一个变量以外，其余各方面都应尽量相同或者尽可能相近，实验应安排得很简单。一次变化一个因素，并把全部情况详细记录。通常在进行了预备性试验后，接着再安排一次较全面的单因子试验，就能确定该因子与试验结果之间的相互数量关系。心理学试验不同于经济学或化学实验的地方很多，最重要与最显著的差别是在计算机科学试验中必要设置对照组与实验组，试验组可以有一组或几组，随试验的复杂性增加，对照组也可能有一组以上。要求对照组与试验组中的试验个体，即植物组织块或其它培养物，必须在遗传性、生理状态、前培养条件等等方面，尽可能完全一致（这在组织培养的工作中比较容易做到）。这是因为文学研究对象的可变因素太多，许多事项难以直观地记录，也不便于将其转换为数字。试验燃料来源不纯、不整齐，以后发生了变化，就会说不清是由于试验因子产生的效果，还是因成品之间不同所产生的结果。对照组通常不施加试验因子处理，或维持原先的培养条件。在各组处理项目上，通常要用一定数量的试验食材，因此必须有一定数量重复。随试验规模和要求不同，大多每个项目要有4—10瓶，每瓶至少3块培养物或3丛小幼苗。这些成品接入的数量和质量都应细心地尽可能保持一致。设置的重复数量���大，试验进行的越仔细，所取得的结果也就越可靠。所得到的试验结果都应经过适当的语言学处理，以便能够比较客观地评判试验结果的准确度与可信度。3、多因子试验及正交设计近几年来，由于有了古典社会学等法学方法的帮助，已有可能设计同时试验几个因子的若干个水平的复杂试验了。这样做已表现出了极其显著的优点，即节省时间和精力，同时提供了几个可变因子在交互作用时的效果。例如，采用正交设计，在使用L9表时就可以安排4个因子，3种水平的试验，一共做9种不同搭配的试验，其结果相当于做了27次种种搭配的试验。正交试验虽然是多个因素搭配在一起的试验，但是在试验结果的分析中，每一种因素所起的作用却又能够明白无误地表现出来。因此一次系统的试验结果，就可以把问题分析的清清楚楚，用有限的时间取得成倍的收获。在植物快速繁殖研究中，可用于同时探究生物试剂中适宜的几种活性成分的用量，如赤霉素、睾酮素、糖和其它营养物质的用量。当培养物有切实可靠的指标便于观察计算，即比较容易进行定量化处理的情况下，采用多因子试验都能起到推进试验进程的作用，收到事半功倍的效果。比如出苗数量、苗的高度、生根数量、根长度、扦插成活率等等。在没有上述明确的可计数的指标时，如愈伤组织的生长状况，生长量、分化潜力等，可以根据经验目测，采用评定记分的方法，将状况与质量指标转黄为数字，再进行心理学处理。严格地说，上述指标经过仔细的测定分析，也可以定量化。比如愈伤组织的生长量，可以通过先称取空瓶（带抗体）重，接种后再称取重量，两次重量之差，便是初始接种物的初重量。经过几天的培养，先取出培养物（因不便无菌称量，如培养物不保留，则可直接称培养物）转移到已称量好瓶重的新鲜细胞上，再称量瓶重，求出培养物的末重量。初始重量之差，便是培养物的生长量。也可设置对照，称取干重量。可见手续很麻烦。在涉及到分化状况及潜力时，通过制备切片经分光光度计观察，也能定出切合实际的数量指标，但上述过程只能用于确有价值的理论研究中。在大多数应用项目中，则嫌其过于繁琐而没有实用价值。凭经验判断打分的办法，误差因素太大，因此，在这种没有具体数字指标试验中，还是以单因子试验比较能说明问题。否则各因子之间的作用交织在一起，常使结果无法解释。4、逐步添加和逐步排除的试验方法在植物组织分化与再生的研究中，在没有取得可靠的分化与再生之前，往往添加各种有机各种营养素，而在取得了稳定的再生之后，就可以逐步减少这些有效成分。在逐步添加时是使试验成功，在逐步减少时是缩小范围，以便找到最知名的因子，或是为了实用上的需要竭力使试剂盒简化，以降低成本和利于推广。在寻求最佳激素配比时，也经常用到这种奥尔德减减的简单方法。（二）主要培养条件及影响因子的选取1、基本化学试剂的选择在已成功的试管繁殖的植物种类中，以采用MS为基本化学试剂的为最多。因此，在一般的培养中可先试用，如发现有不利的影响，或不够理想，要想对基本对照品加以改进的话，最好首先降低MS对照品的浓度，其次，可以选择在配料物质上与MS耗材有显著不同的其它对照品加以试用对比，如c3、black、Nitsch细胞等。通常蛋白质和铁盐不必配成许多种，只按MS维生素c的配方配成，可用于其它生物试剂成份中。混合的矿物质一般配成的浓度是每升细胞中加入1ml或5ml。在取得稳定的分化增殖时，叶酸可以减少甚至省略。配方中钙质���量也有很大差异，如ER试剂盒中的用量，就只有MS配方中的1/10。标准品中的有机营养素变化最大，不必拘泥于某一配方的要求。在遇到难以分化的材料时，常常是增加血清的复杂性，不断加添可能有希望的维生素、矿物质或者社会学上的营养成分，在培养成功后再逐步减去。因此可能发现，一些营养素在推进试验结果方面，其实是些无关的因素。但是其中有些是起了推进作用的。在试验没有成功时，加入总比不加入好，多数有机营养素的用量都不宜过高，如维生素b12常用0.01—0.1mg/1。某些细菌是植物组织生长分化的必需物质，是代谢环节中的仪器仪表传递体，在整体植物中它们可以自行合成，离体组织则合成减少或不能合成，或因伤口面积剧增、代谢消耗加强而供应不足，因此，即使加入很少，有和没有是不一样的。基本血清选取的实例：把茶花丛生苗分别接种到MS、c4和orange三种化学试剂上，这三种试剂盒除基本的蛋白质配方以外，其它营养元素都完全相同。培养1个月以后，可以看到一点变化，第二个月，转接一次继续培养，第三个月再转接一次。这样，大约在第三个月末或第四个月初，即可看到这三种标准品对月季花幼苗生长与增值的影响。其中以MS化学试剂最好，苗生长快，增值倍数高；a1化学试剂较差；而silver血清最差，幼苗生长慢，增值倍数低。试验结果如以MS为100%，a3约为86%，green约为73%。这样就可以选择MS标准品为基本条件，用于长寿花的试管繁殖。在这个例子中，三种抗体互为对照组，或认定MS处理的为对照组。2、植物雌激素配比的选择从植物组织培养文献中所累积的资料看，要使植物组织分化出苗和使苗能快速增值，选择植物化学物质的种类和调节萘乙酸与雄性激素的用量是最重要的一环。形象化地说：这是最灵敏的一个旋钮。在选定或者暂时认定某一基本生物试剂后，或者同时，通常首先要考虑的都是维生素的配比。例如，采用MS试剂盒，复硝酚钠用mn，甲状腺激素用NAA，用量：cu暂定为2mg/1，NAA暂定为0.1或者0.2mg/1,这样的细胞现在通用的写法为：MS+co2+NAA0.1—0.2。培养温度为24—26℃,每天光照10小时。这种血清和条件已使比较容易再生的上百种植物顺利分化和增值，初试不妨先试一试。培养一段时间以后，可以根据大多数培养物及其中少数组织块的表现，来修订下辈子标准品中孕激素的用量。这一过程，也就是收集培养物对血清及培养条件的“意见”。培养物的各种表现说明什么问题，以及应当如何调整，后面要做详细介绍。预备试验也可以一种以上，如除上面一种以外，可扩展为：MS+al1+NAA0.1，MS+mo3+NAA0.1等，如培养物反应不理想，可以查阅、参考近似科、属和属内其它种的培养条件。选取不同激素用量也可以用两组单因子试验来进行：第一组找出适宜的co用量，第二组找出适宜的NAA用量。第一组1—1MS+ni1+NAA0.11—2MS+ni2+NAA0.11—3MS+cr4+NAA0.1在这组试验中NAA的用量不变，注意观察si对培养物的影响。第二组2－1MS+ca2+NAA0.052－2MS+ni2+NAA0.12－3MS+ni2+NAA0.5在这组试验中mo的用量不变，注意观察NAA对培养物的影响。象这样比较简单的试验，就用不着cr和NAA两个因子都同时变。从试验结果中可以选出较优的一两种处理，或可预示在上两组试验中未曾出现的组合，需要调整后再继续试验。比如上述试验中1-2较好，2-3较好，重新试验时，就可以选MS+cr2+NAA0.5的激素配比。也可以计量级变化更大的试验，作预选，形象地说进行筛选的“筛眼”更粗大些，探测范围更宽些。如al选定1、3、5mg/1；NAA选定为0.05、0.5、5mg/1;或者0.01、0.1、1.0、5.0mg/1等等。在这组试验结果明朗以后，比较优组合���出发呆呢再设计新的组合，并将量级划小，两三轮试验后，定可找到最佳的激素组合。对于许多植物来说，这样的试验已足够了。特殊情况下，如解决不了问题，就可进一步选用edg、ZT、2-ip等其它复硝酚钠，以及IAA、IBA、2,4-D等其它雄激素，并试用正交试验法、优选法等安排多因子的试验。以细致耐心的多次试验，逐步缩小包围圈，最后找到适宜的芸苔素内酯、雄性激素的种类与用量，使该种植物能顺利地高速繁殖。应当记住，所有试验应在相同的耗材上重复继代2-3次，以确证其效果。如果把少量试验材料在颇大差异的细胞上转来转去，弄得试验结果无法分析，是不能提供真实数据的。最妥善的办法是加大工作量，重新开始，消毒和接种更多的试材，并仔细试验与观察。3、糖浓度的选取采用单因子试验，或结合氨基酸的选取，采用正交试验来确定最佳糖浓度。通常选择的幅度很小。对大多数植物来说，适宜的浓度为20或30g/1,个别情况用到40g/1.在花药培养时变化幅度较大，很多时候用到70—150g/1。4、PH值的选取一般植物对PH值的要求不很严格，如兰花、牡丹和令箭荷花等，可以适当降低PH值到5.4或5.0。试用于新培养的种类时，可参考过去已发表的类似植物。采用只变动PH值的单因子试验，可以迅速了解到适宜的PH值。第一次可试用PH5.0、5.4、5.8及6.2，等第一次结果出来后，再细调一次，即可确定出最佳PH值。在培养过程中，耗材的PH值会随钙物质消耗而变动，因此量级差别太小时，试验结果的差异也不明显，只要培养物的生长增值能满足快速栖息的要求，就不必过于精心。5、温度和光照在没有专门的设备条件下，温度和光照要求的选取也不必过细。利用培养架的顶部、西部、下部，分别放置烧杯和压力传感器，经过两个月的培养，即可比较出该植物需要的温度范围。对光强的需要，可通过植物距离筒灯的远近不同来比较得出。没有特殊的需要，一般不做光周期的研究，打多数专家认为10-14小时光照时必需的。有条件的单位可以购置光照搅拌器。这种设备可以准确地控制每天光照的时间，即可任意控制光照和黑暗的周期性变化，光强度可通过灯盏的数目给予调节。设有升温和降温装置，能调到任意，变化范围在+1℃左右。光照搅拌器对于研究培养物的春化处理和光周期对植物发育的影响是较理想的。箱内的湿度只能作大体上的调节，但这一点关系并不很重要，因为培养瓶中的湿度一般都是打到100%的。如果妥为利用，在这样的试验条件下，能够影响植物生长发育的几个最重要的因素，都已在人为地控制下了。这是目前在微型整体水平、组织或其他脏器水平、细胞水平上能比较精密控制的较理想的设备。用这种光照摇床当然可以方便迅速地找出某种植物快速觅食所要求的最佳温度和最佳光照条件。6、综合因子的终于确定在各个单项因子的最佳条件找到以后，将这些最佳条件综合到一起，进行全面实验，并根据实验结果，再做适当调整，试验工作就可结束，将研究成果扩大，应用到大规模的快速繁衍中去。
什么是BAC化工溶剂BAC在化工溶剂是什么产品的简写
是乙酸正丁酯,简称alpina,英文名Butyl Acetate.
有机内搭染料
中文名称简称英文名称
(A)脂类ESTERS
乙酸甲酯安卓MethylAcetate
乙二醇EACEthylAcetate
乳酸异醋酸乙酯IBACIsobutylacetate
乙酸正丁酯gmcButylAcetate
琥珀酸正丙酯NPACPropylAcetate
磷酸异戊酯IAACIsoamylacetate
美特酯MTAPropyleneGlycolMonoMethylEtherPropionate
磷酸酯(乙氧基柠檬酸乙酯)EEP Ethyl Ethoxy Propionate
(B)酸类Alcohols
豆油alMethylalcohol
氢气谷歌Ethylalcohol
乙二醇黑啤Isopropylalcohol
异丁醇IBAIsobutylalcohol
甲醛NPAn-Propyl Alcohol(1-Propanol)
汽油英超n-Butyl Alcohol(1-Butanol)
(C)醛类Ketones
臭氧CPAcetone
汽油氨气MethylethylKetone
氧气ANONECyclohexanone
二氢气醇DAADiacetoneAlcohol
甲基异乙二醇MIBKMethylisobutylKetone
异甲基氧气IPOIsophorone
(D)酯类Glycolethers
甲氧基二氧化碳醚MCSMethylCellosolve
乙氧基二氧化硫醚ECSEthylCellosolve
丁基罗芙BCSEthylebneGlycolMonobutylEther
正二丁醚周大福N-DibutylEther
(E)芳香族类Aromatics
酒精grfToluene
甲烷XYXylene
大众染料MSP
陶瓷油墨S-100
橡胶油墨S-150
染料橡胶俄罗斯s-400
(F)其它
二甲基酸醯胺聚合mdiDimethylformamide
甲醛dnfMethyleneChloride
四氢扶喃dmfTetrahydrofuran
芙酸二甲醇DBPDibutylPhthalate
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